土壤微生物取样与测定操作方法-彩神vll官网

彩神vll官网

为您提供专业的植物、彩神vll官网服务
服务好,费用少

机构联系方式:17314969695
网站地图 | XML地图

当前位置:主页 > 新闻资讯 > 行业新闻 > 行业新闻

土壤微生物取样与测定操作方法
作者:南京易知源 发布时间:2019-11-25 13:25 浏览量:

对于土壤的检测,除了对其内部的营养成分、水含量等等作测量以及定时统计以外,还需好好研究土壤里面的微生物含量和种类,这样才能全面的掌控土质。那么一般对土壤微生物进行测定的时候,取样方法具体是什么呢?其次,取样之后如何进行检测?下面一起来看下小编的报道,看完你就清楚啦。

  一、土壤微生物取样操作方法

 
  1、位置选择
 
  根据研究目的,进行采样点的选择,采样点的选择应遵循以下原则:
 
  A、移除土壤表面覆盖物,包括植物、苔藓、可见根系、凋落物以及可见的土壤动物等;
 
  B、对采样器使用酒精棉球擦拭,待酒精挥发完全后,可使用采样样方处土壤浸润采样器。后续每次更换样方均需重复此步骤;
 
  C、同一样方采取多点取样(建议4-5个取样点等量均匀混合为一个样本),去除样品中的植物、可见动物以及石粒等,然后根据土壤情况,选择是否过筛:
 
  ①推荐过2 mm筛;
 
  ②一些有机质(如粗腐殖质或泥炭等)不能通过2mm筛,此时可以选择过4-5 mm筛;
 
  ③如果土壤粘度太大或者含水量太高,可以选择不过筛。
 
  D、将混合好的土壤样本,分装多份(3-5份备份样本),每份3-5 g,标记好样本信息后液氮速冻(如果条件不允许,可置于装有冰/干冰的泡沫盒中,黑暗环境下,尽快运回实验室),随后转移至-80℃冰箱保存,用于测定土壤微生物;另外留出一部分土壤,用于测定土壤理化指标(如有机质、全氮、矿质元素等)。
 
  2、根际土壤(Rhizosphere soil)样本取样方法
 
  (1)作物类(含草地等矮小植物)根际土壤取样方法
 
  A、采集植物植株(多点取样法),去除根部大块土壤,置于装有冰/干冰的泡沫盒中,黑暗环境下,尽快运回实验室;
 
  B、无菌工作台中,晃动植物根部,去除根部松散的土壤后,使用无菌刷子从根部收集残留土壤,或对植物根部使用无菌水(或PBS缓冲液)振荡(详细参数参考引用文献)洗涤植物根系,洗涤液进行12000 g离心10 min以上收集沉淀(或过0.22 μm滤膜,收集滤膜);
 
  C、同一样方多点取样的根际土壤样本等量混合均匀,标记好样本信息后液氮速冻,置于-80℃冰箱保存。
 
  (2)林木类根际土壤取样方法
 
  A、使用土转采集地面下10-20 cm根际土壤,置于装有冰/干冰的泡沫盒中,黑暗环境下,尽快运回实验室;
 
  B、视情况,选择2-5 mm孔径无菌筛网过筛;
 
  C、同一样方多点取样获得的土壤样本等量混合均匀,标记好样本信息后液氮速冻,置于-80℃冰箱保存。

  二、土壤微生物测定方法

 
  1、土壤的前处理(过筛和水分调节略)
 
  2、熏蒸
 
  称取新鲜(相当于干土10.0g,这个可以根据自己土样的情况而定),3份分别放入25ml小烧杯中。将烧杯放入真空干燥器中,并放置盛有无乙醇氯仿(约2/3)的15ml烧杯2或3只,烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠,同时放入一盛有NaOH溶液的小烧杯,以吸收熏蒸过程中释放出来的CO2,干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。盖上真空干燥器盖子,用真空泵抽真空,使氯仿沸腾5分钟。关闭真空干燥器阀门,于25°C黑暗条件下培养24小时。
 
  3、抽真空处理
 
  熏蒸结束后,打开真空干燥器阀门(应听到空气进入的声音,否则熏蒸不完全,重做),取出盛有氯仿(可重复利用)和稀NaOH溶液的小烧杯,清洁干燥器,反复抽真空(5或6次,每次3min,每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子),直到土壤无氯仿味道为止。同时,另称等量的3份土壤,置于另一干燥器中为不熏蒸对照处理。
 
  4、浸提过滤
 
  从干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土样,将土样完全转移到80ml聚乙烯离心管中,加入40ml 0.5mol/L硫酸钾溶液 (土水比为1:4,考虑到土样的原因,此部分熏蒸和不熏蒸土均为4g,即,4g土: 16ml的硫酸钾溶液,当然这个加入量要根据TOC仪器的进入量决定) 300r/min振荡30min,用中速定量滤纸过滤。同时做3个无土壤基质空白。土壤提取液最好立即分析,或-20℃冷冻保存(但使用前需解冻摇匀)。
 
  (注意这部分很重要,有研究结果表明:提取液如果不立即分析,请保存在-20℃,否则将影响浸提液的效果,其次,过滤时不要用普通的定性或定量滤纸,以免长久杂质会堵塞仪器的管路,建议使用那种一次性塑料注射器,配一个0.2um的滤头)。
 
  5、TOC仪器测定
 
  吸取上述土壤提取液10ul (这个要根据仪器自己的性能决定,但是一般情况下,在测定土壤滤液时候,要对其进行稀释,如果不稀释,一方面超过原来仪器的标准曲线,另一方面可能堵塞仪器)注入自动总有机碳(TOC)分析仪上,测定提取液有机碳含量。由于总有机碳分析仪型号较多,不同的型号则操作程序存在较大差异。
  以上是小编针对土壤微生物检测如何进行取样、具体测定方法是什么的相关新闻报道。
关注微信公众号
17314969695